RNA提取的重要性对于科研工作者来说不言而喻。
如何取得完美的RNA提取结果总是让实验小白and实验大神们感到头疼,捧在手心怕它降解,含在嘴里--那是不可能的。
下面,星博士将为大家介绍两种不同的RNA提取方法,并为大家一一分析在提取RNA时,经常会遇到的问题及解决办法。
异硫氰酸胍/苯酚/氯仿抽提法
这是一种传统的RNA提取方法,根据此方法优化后的试剂Trizol成为RNA提取的有效方法。Trizol是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。星博士和大家一起来细数一下传统法的优点,首先就是样本适用范围广。适用于包括动物组织、微生物、培养细胞等在内的各类动物性材料,同时还适用于次生代谢物较少的植物材料,如幼苗、幼叶等。然后就是提取的RNA较纯净。使用效力强的蛋白变性剂,使提取出的RNA蛋白污染极低;通过RNA、DNA在水相和有机相的分离,使提取出的RNA基本无DNA污染。这就是我们思科捷的爆款产品AC0101-SparkZol Reagent,我们的Trizol样本通用性比较广,整体提取时间大概1个小时,而且和市面上常见的竞品都做过对比,性价比很高。
传统法实验流程图
AC0101-SparkZol Reagent 性能展示
离心柱法(柱膜法)
这是目前比较主流的RNA提取方法,该方法使得核酸提取更为便捷与高效,离心柱法的优点主要包括:
工欲善其事必先利其器,想要做好实验,也必然离不开来好的试剂帮助,星博士在这里给您带来全新的组织/细胞RNA快速提取试剂盒,让您的科研更简单!
改良组织/细胞RNA快速提取试剂盒(含基因组DNA清除柱) 货号:AC0202
不仅满足以上要求,该试剂盒还有独特的双柱子(含DNA清除柱、RNA吸附柱),有效去除基因组DNA,操作速度快,20min左右就能完成提取过程,不需要冰上操作。我们优化的裂解液无需再加β-巯基乙醇。
离心柱法实验流程图
AC0202 改良组织/细胞RNA快速提取试剂盒(含基因组DNA清除柱)性能展示
老师们在抽RNA时,经常会遇到哪些问题呢?就让星博士一一给您解答。
常见问题 |
原因分析 |
解决方案 |
RNA降解 |
①实验用品未灭活RNA酶 |
按说明书要求准备各项实验用品 |
②样本拿来后未及时处理 |
样本及时处理或保存在液氮或-80℃ |
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③RNA提取过程较慢,发生降解 |
实验在冰上进行,低温离心,快速操作 |
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④RNA提取后未冷冻保存 |
若不是立即使用,需保存在-80℃ |
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基因组DNA残留 |
①样本量超出了试剂处理范围 |
根据样本选择合适的试剂使用量 |
②吸取上清时吸入了中间相 |
可用量程小的移液枪少量多次吸取 |
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③样品含有机试剂、强缓冲液等 |
漂洗过程中尽可能去除此类物质 |
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RNA产量低 |
①样本裂解或匀浆不彻底 |
液氮充分研磨,加入裂解液可剧烈震荡 |
②组织本身RNA含量少 |
可适当提高样本起始处理量 |
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③样本量超过吸附柱的吸附能力 |
可使用多个吸附柱,洗脱后收集到一起 |
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④去蛋白液和漂洗液忘记加乙醇 |
初次使用,需检查试剂是否可使用 |
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⑤样本在-20℃或-70℃存放太久 |
存放时间长会降低RNA产量,应尽快处理样本,提取时可适当多加样本 |
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OD260/OD280<1.6 |
①溶解RNA时未用TE而用了水 |
应按要求用TE缓冲液溶解RNA |
②有蛋白或苯酚残留污染 |
吸取上清时避免吸到中间层和有机层 |
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下游的RT-PCR 实验不成功 |
①有乙醇残留,抑制反应 |
漂洗离心后,开盖几分钟,让乙醇挥发 |
②有多糖多酚抑制物残留 |
选择合适的RNA提取试剂盒去除多糖多酚 |
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③RNA提取过程中有降解 |
实验在冰上进行,低温离心,快速操作 |
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④提取后未在-20℃或-70℃保存 |
尽可能将RNA保存在-80℃ |
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