打开你实验大门的钥匙--RNA提取

2019-11-21

RNA提取的重要性对于科研工作者来说不言而喻。

如何取得完美的RNA提取结果总是让实验小白and实验大神们感到头疼,捧在手心怕它降解,含在嘴里--那是不可能的。

下面,星博士将为大家介绍两种不同的RNA提取方法,并为大家一一分析在提取RNA时,经常会遇到的问题及解决办法。


异硫氰酸胍/苯酚/氯仿抽提法

这是一种传统的RNA提取方法,根据此方法优化后的试剂Trizol成为RNA提取的有效方法。Trizol是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。星博士和大家一起来细数一下传统法的优点,首先就是样本适用范围广。适用于包括动物组织、微生物、培养细胞等在内的各类动物性材料,同时还适用于次生代谢物较少的植物材料,如幼苗、幼叶等。然后就是提取的RNA较纯净。使用效力强的蛋白变性剂,使提取出的RNA蛋白污染极低;通过RNA、DNA在水相和有机相的分离,使提取出的RNA基本无DNA污染。这就是我们思科捷的爆款产品AC0101-SparkZol Reagent,我们的Trizol样本通用性比较广,整体提取时间大概1个小时,而且和市面上常见的竞品都做过对比,性价比很高。



传统法实验流程图




AC0101-SparkZol Reagent 性能展示


离心柱法(柱膜法)

这是目前比较主流的RNA提取方法,该方法使得核酸提取更为便捷与高效,离心柱法的优点主要包括:

  • 操作步骤更为简洁快速,节省时间;
  • 不使用苯酚、氯仿等有毒试剂,操作更安全;
  • 不使用异丙醇进行沉淀,杂质不会与RNA共沉淀,且有多次漂洗的过程,提取出的RNA纯度更高。

工欲善其事必先利其器,想要做好实验,也必然离不开来好的试剂帮助,星博士在这里给您带来全新的组织/细胞RNA快速提取试剂盒,让您的科研更简单!

改良组织/细胞RNA快速提取试剂盒(含基因组DNA清除柱)   货号:AC0202

  • 操作时间短:20min之内完成RNA提取;
  • 纯度高:获得的RNA纯度高,无蛋白和基因组DNA污染;
  • 基因组残留少:配有基因组DNA吸附柱,可有效去除基因组DNA污染,无需柱上消化等待;
  • 操作简单:无需β-巯基乙醇、无需酚/氯仿抽提、常温操作、不易降解;
  • 通用性强:适用于多种不同类型的细胞、组织RNA的提取;

不仅满足以上要求,该试剂盒还有独特的双柱子(含DNA清除柱、RNA吸附柱),有效去除基因组DNA,操作速度快,20min左右就能完成提取过程,不需要冰上操作。我们优化的裂解液无需再加β-巯基乙醇。


离心柱法实验流程图

AC0202  改良组织/细胞RNA快速提取试剂盒(含基因组DNA清除柱)性能展示


老师们在抽RNA时,经常会遇到哪些问题呢?就让星博士一一给您解答。




见问题

原因分析

解决方案

RNA降解

①实验用品未灭活RNA酶

按说明书要求准备各项实验用品

②样本拿来后未及时处理

样本及时处理或保存在液氮或-80℃

③RNA提取过程较慢,发生降解

实验在冰上进行,低温离心,快速操作

④RNA提取后未冷冻保存

若不是立即使用,需保存在-80℃

基因组DNA残留

①样本量超出了试剂处理范围

根据样本选择合适的试剂使用量

②吸取上清时吸入了中间相

可用量程小的移液枪少量多次吸取

③样品含有机试剂、强缓冲液等

漂洗过程中尽可能去除此类物质

RNA产量低

①样本裂解或匀浆不彻底

液氮充分研磨,加入裂解液可剧烈震荡

②组织本身RNA含量少

可适当提高样本起始处理量

③样本量超过吸附柱的吸附能力

可使用多个吸附柱,洗脱后收集到一起

④去蛋白液和漂洗液忘记加乙醇

初次使用,需检查试剂是否可使用

⑤样本在-20℃或-70℃存放太久

存放时间长会降低RNA产量,应尽快处理样本,提取时可适当多加样本

OD260/OD280<1.6

①溶解RNA时未用TE而用了水

应按要求用TE缓冲液溶解RNA

②有蛋白或苯酚残留污染

吸取上清时避免吸到中间层和有机层

下游的RT-PCR

实验不成功

①有乙醇残留,抑制反应

漂洗离心后,开盖几分钟,让乙醇挥发

②有多糖多酚抑制物残留

选择合适的RNA提取试剂盒去除多糖多酚

③RNA提取过程中有降解

实验在冰上进行,低温离心,快速操作

④提取后未在-20℃或-70℃保存

尽可能将RNA保存在-80℃

想要了解更多的分子生物学相关产品,请关注思科捷网www.sparkjade.com。我们将持续加大研发投入,丰富产品种类,苛求产品质量,不断为广大科研用户提供更加可靠的产品和更优质的服务,真正做到思以科,捷所成!

  • 在线客服
  • 在线留言
  • 联系电话
    400-6947-688
  • 招商热线
    185 6251 5130
  • Copyright © 2019 山东思科捷生物技术有限公司  All right reserved 浩赛官网 科学仪器     备案号 鲁ICP备2022004154号-3