为什么蛋白实验结果的重复性差？为什么明明是同一管样品，再次使用就没有结果了呢？当你还在冥思苦想的时候，蛋白可能已经在悄悄降解了……

图1 蛋白降解图

世界上没有两个完全一样的东西，正如世界上不会出现两个降解程度一模一样的蛋白。

如图1所示，不同样品甚至不同泳道上的蛋白降解程度都是不一样的。泳道2中蛋白降解非常严重，以至于在显影后无法检测到；泳道3-1，3-2中蛋白部分降解，显影后下方出现降解条带，当蛋白降解程度再重时，会出现不同长度的蛋白降解条带，呈现弥散状或直接无法检测。

在体外研究中，蛋白合成过程终止后，降解作用大大增强，其中蛋白酶在蛋白降解过程中发挥着重要作用。

蛋白酶是水解蛋白质肽链的一类酶的总称，主要作用是催化蛋白质水解。

按其水解多肽的方式，可以将其分为内肽酶和外肽酶两类。内肽酶作用于蛋白质多肽链的内部，可以在特定肽键处切割，产生多个较小的肽段；外肽酶则作用于蛋白质或多肽链的末端，逐个将肽键水解，释放出单个的氨基酸。按其作用活性中心，又可将蛋白酶分为丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金属蛋白酶等。

为了保护蛋白，降低蛋白降解的风险，在实验中抑制蛋白酶的活性便是首要的任务，因此蛋白酶抑制剂身担重任。

根据氨基酸序列的同源性和靶向蛋白酶的不同，蛋白酶抑制剂可分为丝氨酸蛋白酶抑制剂、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、天冬氨酸蛋白酶抑制剂以及金属蛋白酶抑制剂。

实验中常用的PMSF（苯甲基磺酰氟）就是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，它会特异性的结合到丝氨酸蛋白酶的活性区域，从而抑制蛋白酶的作用，保护蛋白。

但是在实验过程中，不同类型的蛋白提取物中会含有不同类型的蛋白酶。例如，哺乳动物细胞提取物中通常含有高丰度的丝氨酸蛋白酶，哺乳动物组织提取物中主要含有丝氨酸、半胱氨酸和金属蛋白酶，细菌提取物通常含有较多的丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶，植物提取物中常含有大量的丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶，还有一些含有天冬氨酸蛋白酶。

由此可知，在种类多样的实验样本前，单一的蛋白酶抑制剂已经不能满足实验要求了，于是蛋白酶抑制剂cocktail应时而生，其含有多种蛋白酶抑制剂成分，能同时抑制多种蛋白酶活性，对蛋白的保护更加全面。

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