生物样本库中的哺乳动物细胞或组织提取物含有许多内源性的蛋白酶和磷酸酶,在提取蛋白质的过程中,这些酶的释放可能导致提取物中的蛋白质降解或去修饰,从而影响后续的蛋白质检测。因此,加入蛋白酶抑制剂的这一步骤是至关重要的,它们能够保证蛋白质的完整性和活性,进而提高实验数据的稳定性、重现性和可比性。
蛋白酶抑制剂通过特异性结合到蛋白酶的活性中心,与关键氨基酸残基相互作用,从而降低或完全抑制其催化活性,这种作用机制通常不会使蛋白酶变性,因此能够保持蛋白酶结构的完整性。
蛋白酶抑制剂根据其组分的多样性可分为两大类:单一成分和复合型 (cocktail) 。
1、单一成分蛋白酶抑制剂:
例如大家最熟悉的 PMSF (苯甲基磺酰氟化物) ,它是一种不可逆的抑制剂,专门针对丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶。PMSF 具有一定的毒性,且在水溶液中的半衰期为 30 min,在细胞裂解过程中很容易失效。
2、复合型蛋白酶抑制剂 (cocktail) :
这类抑制剂是由多种不同机制的抑制剂按照特定比例混合而成,可起到广泛的抑制效果,适应多样化的样本处理需求。
根据成分是否包含 EDTA,复合型 cocktail 可细分为含 EDTA 和不含 EDTA 两种类型。EDTA 能够与金属离子 (如 Ca2+,Mg2+,Ni2+等)形成螯合物,有效抑制依赖金属离子的蛋白酶活性。在需要维持金属离子活性的实验中,例如纯化 His 标签蛋白或进行 2D 电泳时,推荐使用不含 EDTA的蛋白酶抑制剂 cocktail。
AEBSF:是一种有效的丝氨酸蛋白酶抑制剂,具有高度特异性和较强的抑制能力,对许多丝氨酸蛋白酶有抑制作用。
Aprotinin:是一种从牛肺中提取的小分子蛋白,能够抑制胰蛋白酶、血浆酶等丝氨酸蛋白酶的活性。
Bestatin:是一种氨基肽酶抑制剂,能够抑制多种氨基肽酶的活性,从而保护多肽和蛋白质不被这些酶降解。
E-64:是一种环氧酮类化合物,能够抑制半胱氨酸蛋白酶的活性,如木瓜蛋白酶和组织蛋白酶 B。
Leupeptin:是一种从细菌中提取的化合物,能够抑制丝氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶的活性。
Pepstatin A:是一种酸性蛋白酶抑制剂,能够特异性地抑制天冬氨酸蛋白酶如胃蛋白酶的活性。
为得到更佳的实验结果,这里有一些小贴士请您留意哦。
均匀混合:在缓冲液中加入蛋白酶抑制剂时应充分混匀,以确保其充分发挥作用。
新鲜配制:推荐现用现配含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液,以保持其活性和效果。
掌握这些细节后,现在让我们为您隆重介绍科研品质的守护者---思科捷蛋白酶抑制剂Cocktail
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包含6种广谱蛋白酶抑制剂,能够有效抑制丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、酸性蛋白酶和氨肽酶等多种蛋白酶的活性,从而保护蛋白质的完整性。适用于从哺乳动物组织、细胞中提取蛋白质,能够更有效的获得目的蛋白。
即用型浓缩存储液,不含 EDTA 。
应用范围广泛可用于蛋白质免疫印迹 (WB)、免疫沉淀 (IP)、免疫共沉淀 (Co-IP)、Pull-down、免疫组织化学 (IHC)、免疫荧光 (IF)、激酶研究等多种分析。
高品质保护六种蛋白酶抑制剂组成,浓度确定,全方位抑制蛋白酶活性,保护更全面。
在室温下解冻 DMSO 储液,按照 1:100 (体积比) 将蛋白酶抑制剂 Cocktail 加入到裂解液中,混匀即可使用。
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